Pirolidono pH vertės ir temperatūros poveikis PVP vandeniniam tirpalui vaidina svarbų vaidmenį išsaugant ląstelių sėklas. Tinkamas veikimas ir tinkamos užšalimo sąlygos gali sumažinti ląstelių charakteristikų pasikeitimą arba praradimą. Nesujungtas PVP tirpalas neturi ypatingo tiksotropiškumo, nebent jis yra tiksotropinis esant didelei koncentracijai ir pasižymi labai trumpu atsipalaidavimo laiku. Ląstelių šaldymo patirtis: geriausias būdas yra pasirinkti tinkamą šaldymo įrankį. Ląstelių šaldymas – tai technologija, kuri saugo ląsteles žemos temperatūros aplinkoje, mažina ląstelių metabolizmą ir užtikrina ilgalaikį saugojimą. (Pirolidonas) Daugumoje ląstelių linijų PVP storinimas yra glaudžiai susijęs su jo santykine molekuline mase. Esant tam tikroms koncentracijos sąlygoms, kuo didesnė santykinė molekulinė masė, tuo didesnis jos klampumas. Ląstelės ir toliau kaupsis ir keisis su senėjimu ir evoliucija, sukeldamos fenotipo ir genotipo „kultūros dreifą“. Teisingas ir sėkmingas užšaldymas vaidina svarbų vaidmenį ilgalaikiam ląstelių naudojimui.
Todėl užšaldymo proceso metu koreguokite kultivavimą ir švelnų ląstelių surinkimą, prieš užšaldant ląstelės turėtų išlaikyti geriausią augimo būseną (logaritminėje arba eksponentinėje fazėje). Idealiu atveju auginimo terpę reikėtų pakeisti likus 24 valandoms iki derliaus nuėmimo. Rekomenduojama patikrinti, ar kultūroje nėra mikrobinių teršalų, ypač mikoplazmų, kad įsitikintumėte, jog ląstelės nėra užterštos. Ląstelių rinkimo proceso metu eksperimentinė operacija turėtų būti kiek įmanoma švelnesnė, kad būtų išvengta ląstelių pažeidimo. (Pirolidonas) Tinkama krioprotektorė. Šiuo metu dažniausiai naudojama ląstelių užšaldymo technologija yra skysto azoto kriokonservavimas, kurio metu daugiausia naudojamas lėtas užšaldymas su atitinkamu kiekiu apsauginės medžiagos, kad užšaldytų ląsteles ir sumažintų ląstelių žalą užšaldymo proceso metu. Jei ląstelės užšaldomos tiesiogiai be apsauginės medžiagos, vanduo ląstelių viduje ir išorėje greitai suformuos ledo kristalus, sukeldamas daugybę nepageidaujamų reakcijų.
Polivinilpirolidonas, etilenglikolis, metanolis ir metilacetamidas yra apsauga nuo šalčio. Dimetilsulfoksidas (DMSO) ir glicerolis yra dažni ląstelių kriokonservavime. Šios dvi medžiagos turi mažą molekulinę masę, didelį tirpumą ir gali lengvai prasiskverbti į ląsteles. Jie gali sumažinti užšalimo temperatūrą ir padidinti ląstelių membranų pralaidumą vandeniui. Raktas slypi ląstelės prigimtyje. (Pirolidonas) DMSO koncentracija paprastai yra 5-10 % (v/v), o optimali koncentracija skiriasi priklausomai nuo skirtingų ląstelių linijų. Galutinė glicerolio koncentracija šaldymo terpėje yra 5-15%. Panašiai optimali koncentracija priklauso nuo ląstelių linijos. Norėdami padidinti sunkiai konservuojamų ląstelių išgyvenamumą, galite pasirinkti padidinti serumo koncentraciją konservavimo tirpale kriokonservavimo metu. Jei norite užšaldyti ląsteles greičiau ir stabiliau, ląstelių užšaldymo tirpalas būtų geras pasirinkimas. Jokio pasiruošimo nereikia. Tiesiog į ląsteles įpilkite atitinkamą kiekį šaldymo tirpalo. Operacija yra paprasta ir galite turėti didelio gyvybingumo ląstelių.
